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葡萄酒中白藜蘆醇苷和白藜蘆醇的測定解決方案

2018-07-31

? ? ? ? 白藜蘆醇及其糖苷是廣泛存在于葡萄屬植物中的一種具有保健作用的植物應激素,具有順式和反式兩種構型。通常條件下,多數方法不能同時測定4種異構體,因而測定結果不能真實反映葡萄酒中白藜蘆醇異構體的含量。


? ? ? ? 迪馬科技建立的《葡萄酒中白藜蘆醇苷和白藜蘆醇的測定》方案,無需樣品提取過程,調節pH 后,直接使用ProElut BLC 白藜蘆醇檢測專用固相萃取柱進行凈化,高效液相色譜法檢測??梢暈≡衿咸啞分?、改進釀造工藝、判斷紅酒真偽及質量等等方面提供重要的參考。


專用柱優勢:
? ? ? ? ProElut BLC 柱填料由多種吸附劑按照一定的比例分層填裝而成,采用多種作用機理去除葡萄酒中酚類化合物,如黃酮、花色素、單寧等,適用于各類葡萄酒中白藜蘆醇的檢測;本產品是商品化的成品柱,吸附劑穩定性好,不受外界環境因素影響,保證實驗結果的重現性和準確性;過柱過程中操作步驟簡單,有機溶劑用量少,減少對人體的危害同時提高工作效率。


? ? ? ? 以下為詳細解決方案,敬請參考!


葡萄酒中白藜蘆醇苷和白藜蘆醇的測定


1、適用范圍
? ? ? ? 本方案適用于葡萄酒中順反式白藜蘆醇苷和順反式白藜蘆醇的檢測。


2、標準品配制
(1) 標品
① 儲備液

反式白藜蘆醇苷1000 μg/mL:溶劑為甲醇;
反式白藜蘆醇1000 μg/mL:溶劑為甲醇。


② 混合標準溶液制備:
順反式白藜蘆醇苷混標:取1 mL反式白藜蘆醇苷1000 μg/mL儲備液于透明10 mL帶蓋玻璃管中,在254 nm和365 nm混合波長下避光照2 h,取40 μL用30%乙腈水稀釋至1 mL,同時制備40 μg/mL反式白藜蘆醇苷溶液,進行HPLC分析,采用外標法以峰面積進行計算,得反式白藜蘆醇苷濃度295 μg/mL、即順式白藜蘆醇苷濃度705 μg/mL;


順反式白藜蘆醇混標:取1 mL反式白藜蘆醇1000 μg/mL儲備液于透明10 mL帶蓋玻璃管中,在254 nm和365 nm混合波長下避光照2 h,取40 μL用30%乙腈水稀釋至1 mL,同時制備40 μg/mL反式白藜蘆醇溶液,進行HPLC分析,采用外標法以峰面積進行計算,得反式白藜蘆醇濃度405 μg/mL、即順式白藜蘆醇濃度595 μg/mL;


四種物質混合標準溶液:取等體積的順反式白藜蘆醇苷混標和順反式白藜蘆醇混標混勻,得到四種物質混標,濃度分別為:反式白藜蘆醇苷濃度147.5 μg/mL、順式白藜蘆醇苷濃度352.5 μg/mL、反式白藜蘆醇濃度202.5 μg/mL、順式白藜蘆醇濃度297.5 μg/mL;

(2) 加標方法:取四種物質混合標準溶液400 μL,加至5 mL樣品中。


3、樣品制備
取約50mL樣品于100 mL燒杯中,用氨水調節樣品pH至6.0,取出5 mL待凈化(如需進行回收率測試,在此步驟加入混合標準品)。


4、凈化——ProElut BLC 6 mL(Cat.# 65918)
a活??? 化: 依次加入5 mL甲醇、5 mL水,流出液棄去;
b上??? 樣: 加入待凈化液,流出液棄去;
c淋??? 洗: 加入5 mL 30%甲醇水,流出液棄去,推干小柱;
d洗??? 脫: 加入5 mL甲醇,收集流出液;
e重新溶解: 將流出液在55 ℃下氮吹至低于1 mL,用流動相定容至5 mL,供HPLC分析。


5、色譜條件
色譜柱: Platisil ODS 250 × 4.6 mm, 5 μm(Cat.# 99503)
流? 速: 1.0 mL/min
檢測器: 303 nm
柱? 溫: 30 ℃
進樣量: 20 μL
流動相: 乙腈:水 =30:70


6、添加回收結果

白藜蘆醇苷和白藜蘆醇的HPLC檢測的添加回收結果

目標物

添加水平(mg/L)

甘露之城干紅葡萄酒(%)

空白含量(mg/L)

反式白藜蘆醇苷

11.8

101.27

4.43

順式白藜蘆醇苷

28.2

103.91

4.74

反式白藜蘆醇

16.2

100.00

0.98

順式白藜蘆醇

23.8

101.24

0.66

?

白藜蘆醇苷和白藜蘆醇的HPLC檢測的添加回收結果

目標物

添加水平(mg/L)

拉菲葡萄酒(%)

空白含量(mg/L)

反式白藜蘆醇苷

11.8

100.23

7.00

順式白藜蘆醇苷

28.2

100.42

9.89

反式白藜蘆醇

16.2

102.03

2.83

順式白藜蘆醇

23.8

100.54

2.64

?

7、色譜圖

白藜蘆醇苷和白藜蘆醇的標準液相色譜圖

?


甘露之城干紅葡萄酒(空白樣品)的液相色譜圖

?


甘露之城干紅葡萄酒(加標樣品)的液相色譜圖



拉菲葡萄酒(空白樣品)的液相色譜圖

?


拉菲葡萄酒(加標樣品)的液相色譜圖

?

葡萄酒中白藜蘆醇苷和白藜蘆醇的測定相關產品信息:

貨號

名稱

規格

樣品前處理

65918

ProElut BLC

6 mL, 30/pk

244358

12管防交叉污染真空SPE萃取裝置

12位

4803

1,3,6mL柱管通用連接器

15/pk

4806

考克(控制流量)

15/pk

99011

真空/正壓兩用泵,無油

1/pk

99013

抽濾瓶套裝

(包括硅橡膠管2米,2L抽濾瓶及橡膠塞)

1/pk

30039

FitMax針頭式過濾器 Nylon

13 mm,0.22 μm 100/pk

30040

FitMax針頭式過濾器 Nylon

13 mm,0.45 μm 100/pk

色譜柱及?;ぶ?/strong>

99503

通用型反相液相色譜柱

Platisil ODS

250 × 4.6 mm, 5 μm

6201

EasyGuard C18 ?;ぶ?/p>

10 × 4.0 mm 1/pk

2個柱芯+1個柱套

HPLC溶劑?緩沖鹽?離子對試劑

50102

甲醇? HPLC級

4 L

50101

乙腈? HPLC級

4 L

通用色譜產品

52401B

瓶架/藍色(現貨)

50孔

52401A

瓶架/白色(現貨)

50孔

1034

樣品瓶(棕色/螺紋)

2 mL, 100/pk

1035

樣品瓶蓋/含墊(已經組裝)

100/pk

H80465

HPLC 進樣針

25 μL

紅色產品貨號#30039、#30040、#1034、#1035火熱促銷中

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